色譜柱的特點和分類

3-1 柱的結(jié)構(gòu)
　　1、堵棒（或?qū)Ч埽?、接頭　3、接頭　4、密封圈　5、螺帽　6、柱密封圈　7、柱管　8、柱填料　9　10、過濾片
　  3-2 柱的分類：
根據(jù)所有的擔(dān)體材料分為三種：
　　a.硅膠型：機械強度高，易制成小顆粒，理論塔板數(shù)高。
　　b.聚全物型：在廣泛的PH值范圍內(nèi)穩(wěn)定
　　c.羥基磷灰石型：對蛋白質(zhì)等生物高分子樣品有特殊的選擇性。
根據(jù)分離方式分類：
　　a.硅膠型
　　　1） 正相：SIL--磷脂、NH--糖、維生素E，CN--甾類激素。
　　　2） 反相：ODS（C18）、（C8 CN TMS Pheny1）低分子量化全物。
　　　3） 離子交換：
　　　　　WAX（弱堿陰離子交換）--核苷酸、蛋白質(zhì)
　　　　　WCX（弱酸陽離子交換）--蛋白質(zhì)
　　　　　SAX（強堿陰離子交換）--核苷酸
　　　　　SCX（強酸陽離子交換）--兒茶酚膠
　　　4）凝膠過濾：
　　　　　Diol--蛋白質(zhì) GF--蛋白質(zhì)
　　b.聚合物型：
　　　1）反相：ODP--50--肽，蛋白質(zhì)，低分化合物。
　　　2）離子交換：ISC--氨基酸，胍類化合物，ISA--糖，IC--無機離子，PA--蛋白質(zhì)，ES--蛋白質(zhì)。
　　　3）配位交換：SCR（磺化聚苯乙烯）--糖。
　　　4）離子排阻：SCR-101H 102H--有機酸
　　　5）凝膠過濾：ION--多糖 GS--水溶性分子
　　　6）凝膠滲透色譜（GPC）：GPD--合成分子、橡膠。
　　　7）羥基磷灰石型：HPC--蛋白質(zhì)、核苷酸
按尺寸分類：
　　1.制備：30mm 50mm 內(nèi)徑，半制備：20mm內(nèi)徑。
　　2.分析：標(biāo)準(zhǔn)型柱：4_8mm內(nèi)徑。
　　　　　　快速色譜柱：3mm內(nèi)徑、5cm長、4.6mm內(nèi)徑。
　　　　　　小孔徑柱：2.5mm內(nèi)徑，微孔徑柱1mm內(nèi)徑。
3-3柱的技術(shù)指標(biāo)
　　*耐壓：不小于40Mpa。
　　*滲透性：反相--流動相甲醇1ml/min，壓力3Mpa。
　　　　　　　正相--正乙烷1ml/min,壓力3Mpa.
　　*柱效：理論塔板極數(shù)>3x103。
　　*對稱柱：葸峰不對稱因子AS在0.8~2.0范圍內(nèi)。
　　*外觀：光潔、標(biāo)牌、尺寸、填充劑、流動相方向、日期等。
ODS柱
　　ODS（C18）色譜柱是將十八烷基鍵合在擔(dān)體的表面，然后填充的柱，在HPLC中應(yīng)用廣。在HPLC中反相色譜的引用占70%，其中極大部分 使用的是ODS（C18）。本公司所附的柱也是ODS（C18）柱，內(nèi)徑4.6mm,長度150mm。
一般反相色譜系統(tǒng)，流動相為極性溶劑，如水、甲醇、乙腈，非極性固定相，如十八烷基。反相系統(tǒng)簡單，重復(fù)性好，柱子能長期穩(wěn) 定工作，能完成分離、分析任務(wù)的60-80%，所以分析工作者使用得zui多的是反相柱。
柱的使用和維護
　　由于柱的質(zhì)量直接影響到樣品組分得分離情況，組分的定性，定量分析，所以在操作時必須十分注意。
　　通常柱子損壞表現(xiàn)為：柱壓升高，柱效下降，保留值改變，峰形崎變等。
以反相為列，它要求填料處于甲醇或乙腈中，不使柱子干枯，并注意下列事項：
　　* 勿使柱子受較強振動
　　* 較長時間不用時，應(yīng)在柱中充滿甲醇，并把兩頭封死，盡量不使干枯。
　　* 當(dāng)用水和甲醇（或乙腈）混合液體溶劑時，工作結(jié)束后必須用純甲醇沖洗30分鐘至1個小時，使柱子處于甲醇中，因水　　　易繁殖微生物， 使柱子堵塞，并降低柱效。
　　* 當(dāng)使用KH2PO4等緩沖液時，鹽的濃度宜低，否則鹽容易析出，柱效降低，柱壓升高，使用后　　　必須用水沖洗（ 絕不能用甲醇沖洗）使緩沖液全部溶于水排出，然后再用甲醇沖洗。
　　* 硅基固定相不宜在PH>8時使用，此時容易產(chǎn)生絮狀物析出，堵塞柱子。
　　* 當(dāng)流動相呈酸性時，使用后必須用水沖洗，因酸使柱效降低，后再用甲醇沖洗。
　　* 流動相經(jīng)過過濾處理。
　　* 樣品也經(jīng)過過濾處理。
　　* 樣品有時能復(fù)蓋填料得活性點，使柱壓升高，保留時間下降，防止方法是樣品經(jīng)過過濾。
　　* 樣品組分的不可逆吸附，使柱壓升高，柱效降低（通常易被吸附的有蛋白質(zhì)、糖）防止方法是加保護柱和溶劑反沖，　　　zui常用的是四氫呋喃。
　　* 當(dāng)流動相從A換到B時，A、B不相溶，必須選擇一能同A、B互溶劑C，先換成C再把C換成B，zui常用的中間液是異丙醇。
　　* 由于長期使用，在較大的壓力下，擔(dān)體破裂而流失在柱前端形成一段空隙，使柱效下降，峰形畸變。維護方法：卸下　　　接頭，用甲醇把填料調(diào)成糊狀，填入柱內(nèi)，同時將過濾片用超聲波清洗機清洗一次。